la protéine fluorescente verte (gfp) est une sorte de protéine bioluminescente, trouvée chez les coelentérés. gfp est facile à détecter, haute sensibilité, propriétés de fluorescence stable, forte tolérance, facile à exprimer, sans cytotoxicité, utilisé pour la détection de cellules vivantes. par conséquent, gfp peut être utilisé comme gène rapporteur pour détecter l'expression ou la régulation des gènes, ou comme marqueur de fusion pour détecter la localisation, la migration, le changement de conformation et l'interaction intermoléculaire de la molécule protéique ou certains organites. le pic maximal du spectre d'absorption de gfp est de 395 nm (uv), et avec un pic d'absorption de 470 nm (rayon bleu). le pic maximal du spectre d'émission est de 509 nm (rayon vert) et avec un pic latéral de 540 nm (shouder). 450nm-490nm seulement est le pic d'absorption adjoint de gfp, mais parce que la lumière d'excitation fait moins de dommages aux cellules, la bande est habituellement utilisée plus fréquemment (principalement 488nm). en outre, les propriétés spectrales de gfp sont similaires à isothiocyanate de fluorescéine (fitc), les deux ont généralement un ensemble de filtres. La fluorescence de gfp est extrêmement stable. sous la lumière d'excitation, la capacité de photo-blanchiment gfp est plus forte que la fluorescéine. en particulier, il est plus stable à l'onde de rayon bleu de 450nm-490nm. de même, la sensibilité de la fluorescence de la protéine de fusion gfp est supérieure à celle de l'anticorps fluorescent du marquage au fluorochrome, est une forte capacité de blanchiment anti-lumière, qui convient mieux à la détermination quantitative et à l'analyse. la génération de fluorescence de gfp n'a besoin d'aucun substrat de réaction exogène. par conséquent, gfp en tant que protéine rapporteur vivante largement appliquée, son effet est inégalé par toute autre protéine rapporteur d'enzyme. cependant, gfp n'est pas une enzyme. le signal de fluorescence n'a pas d'effet d'amplification enzymatique. ainsi, la sensibilité de gfp est peut-être inférieure à celle d'une autre protéine rapporteur d'enzyme, comme la luciférase de luciole.

les façons d'observer gfp:

Source de lumière d'excitation de gfp 1.portable

l'utilisation de la source de lumière d'excitation gfp portable est la méthode d'observation la plus pratique et la plus rapide (appelée miroir d'observation des protéines fluorescentes). parce que gfp a un pic d'absorption plus élevé sur 470 nm, l'utilisation de la source de lumière d'excitation 470 nm peut stimuler gfp à émettre une fluorescence vert vif. nous devons porter un verre d'observation professionnelle pour observer le signal de fluorescence claire lorsque nous observons fluorescence de gfp . la raison est que la lumière d'excitation est une lumière bleue intense.

Source de lumière 2.uv

en utilisant une source de lumière UV (appelée lampe UV , lampe noire) observation est également très pratique. mais si vous observez la plante, le feuillage vert du feuillage des plantes est également fluorescent sous la lumière ultraviolette. ça va interférer pour fluorescence de gfp . de plus, les échantillons peuvent également endommager les spécimens GFP sous UV.

Microscope 3.fluorescence

microscope à fluorescence est basé sur uv comme source de lumière, est utilisé pour irradier l'objet détecté, le rend fluorescent, puis observe la forme et l'emplacement de l'objet sous un microscope. microscope à fluorescence est utilisé pour rechercher l'absorption des substances intracellulaires, le transport, la distribution et l'emplacement des substances chimiques. certaines substances dans la cellule, comme le vert feuillu, peuvent devenir fluorescentes après l'irradiation de la lumière ultraviolette. d'autres substances, ne fluorescent pas en eux-mêmes, mais si vous le teignez avec un colorant fluorescent ou un anticorps fluorescent, peut également fluorescer par la lumière ultraviolette. Le microscope à fluorescence est l'un des outils de recherche qualitative et quantitative sur ces substances. à l'heure actuelle, la méthode populaire utilise l'observation au microscope à fluorescence. Le microscope à fluorescence est très populaire en laboratoire. mais la seule lacune est que les tranches de feuille ou d'animal doivent être collectées pour l'observation, ce qui détruira les spécimens cultivés et ne peut pas observer la viviparité.

analyse complète, c'est la méthode la plus rapide et pratique pour observer gfp en adoptant la source de lumière d'excitation gfp portable (appelé bios-cope transgénique).